人臍靜脈融合細胞(EA.hy926)
細胞介紹：
在PEG脅迫下，將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細胞與抗硫鳥嘌呤的A549克隆株融合， 構(gòu)建了人臍靜脈細胞株,EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926己經(jīng)過100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示 Weibel-Palade小體的細胞質(zhì)分布以及組織特異性的細胞器，分化的內(nèi)皮細胞特性 如血管，體內(nèi)平衡/血栓形成，血壓及炎癥反應(yīng)。
 
細胞培養(yǎng)步驟：
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1.準備 DMEM-H 培養(yǎng)基(DMEM-H，GIBCO添加 NaHC031.5g/L)， 90%;胎牛血清，10%。（DMEM 液體培養(yǎng)基：GIBCO)。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
復(fù)蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
 
人臍靜脈融合細胞(EA.hy926)對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。力口2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加1〇%DMSO后進行凍存。
 
注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
 
細胞特性：
1)來源：靜脈內(nèi)皮細胞與A549細胞株融合
2)形態(tài)：梭形，貼壁生長
3)含量：>lxl06 個/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

人臍靜脈融合細胞(EA.hy926)運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。
細胞用途：僅供使用。